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PLC-PRF-5細胞
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更新時間
2024-03-15 14:52:29
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一、乾思關(guān)于PLC-PRF-5細胞細胞株的聲明
PLC-PRF-5細胞 。上海乾思生物公司細胞近3000種,來源于美國ATCC,細胞都是經(jīng)過嚴格質(zhì)量控制,在大陸努力搭建正牌細胞與國內(nèi)廣大科研人員之間的溝通橋梁。為您PLC-PRF-5細胞外,還有更多相關(guān)實驗產(chǎn)品,標準品,細胞株和實驗技術(shù)服務(wù)等等前期后續(xù)服務(wù)。
市面上的PLC-PRF-5細胞“李鬼”細胞荼毒科研,科學家指出被污染細胞系使生物醫(yī)學遭受嚴重損失,細胞的身份至關(guān)重要。
二、購買上海乾思生物PLC-PRF-5細胞注意事項--(乾思生物)發(fā)布
2.1 客戶收到細胞先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議受收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;
收到PLC-PRF-5細胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞。
2.2 如為懸浮細胞,吸出培養(yǎng)液,1000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。
注意:換液時一半用我們的培養(yǎng)基,一半用你們的,以免細胞不適應而造成生長不好。
2.3 細胞出現(xiàn)問題,可重發(fā)的情況有哪些?判定標準是什么?
(1)細胞運輸途中遭遇的各種問題,細胞丟失、破損、漏液等,重發(fā);
(2)凍存的細胞復蘇后,絕大多數(shù)細胞未存活,重發(fā);
(3)存活的細胞靜置24小時后,絕大多數(shù)細胞未存活,重發(fā);
(4)凍存的細胞復蘇后或存活的細胞靜置4小時后并且未開封,出現(xiàn)污染,重發(fā);
(5)視具體情況而定。
2.4 細胞出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況有哪些?
(1)客戶造成細胞污染,不重發(fā);
(2)客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
(3)細胞狀態(tài)不好,未細胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā);
(4)細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的,不重發(fā);
(5)細胞收到2天內(nèi),未告知,不重發(fā);
(6)視具體情況而定。
三、原代【PLC-PRF-5細胞】培養(yǎng)之掃雷行動
錯誤1:一小管原代PLC-PRF-5細胞在水浴中解凍一段時間
糾正1:原代PLC-PRF-5細胞對解凍過程非常敏感,因此將小瓶置于37℃水浴中,保持并輕輕旋轉(zhuǎn)直到內(nèi)容物剛剛解凍是很重要的。然后應立即從水浴中取出小瓶,并轉(zhuǎn)移到無菌操作臺。確保您的培養(yǎng)瓶在解凍前已經(jīng)準備就緒,以便可以立即用于接種細胞,并置于培養(yǎng)箱中。
錯誤2:解凍match小瓶后直接離心原代PLC-PRF-5細胞
糾正2:我們不建議在解凍后離心細胞,因為離心程序比少量的DMSO殘留更有害。記住,在恢復原代細胞后的第二天更換培養(yǎng)基以去除任何殘留的DMSO。
錯誤3:允許原代細胞變得過于融合
糾正3:當生長至100%匯合時,原代細胞可以變得衰老。記住,原代細胞不是100%純,因此重要的是盡量減少污染細胞的生長。我們建議在細胞達到90-95%融合時,對原代細胞進行傳代培養(yǎng)。
錯誤4:傳代原代PLC-PRF-5細胞時過度胰蛋白酶消化
糾正4:當細胞傳代時,使用低濃度的胰蛋白酶并在顯微鏡下密切監(jiān)測細胞。此外,記得在胰蛋白酶消化后完全中和細胞中的胰酶,因為任何活性的胰蛋白酶都將損傷細胞。
錯誤5:原代PLC-PRF-5細胞可以很容易地重新凍存
糾正5:通常我們不重新凍存原代PLC-PRF-5細胞,因為這可以促進細胞衰老和/或?qū)е鹿δ茏兓?。原代細胞非常敏感,重新凍結(jié)可能導致細胞死亡或損傷。
錯誤6:原代PLC-PRF-5細胞可以無限的增殖
糾正6:與細胞系不同,原代PLC-PRF-5細胞具有有限的擴增能力。我們建議盡早使用原代細胞進行實驗以防止遺傳漂移。此外,如果你正在使用一個增值困難的細胞類型,你應該密切監(jiān)測細胞形態(tài),因為少量混雜的細胞(如成纖維細胞)可能隨著時間的推移,大量生長從而成為主要細胞。
錯誤糾正后就該步入正軌啦——
應如何進行凍存細胞的培養(yǎng)?
下列步驟以單管凍存細胞進行培養(yǎng)的實驗方案為例。
準備一燒杯37°C的水。
從液氮儲存中取出一管細胞,注意保護手和眼睛。
擰松管蓋1/4圈,等待10秒鐘以釋放螺紋中可能殘留的液氮,再重新擰緊管蓋。
將凍存管的下半部分置于37°C水浴中進行解凍,直至凍存管內(nèi)僅剩余一小塊冰芯,使細胞迅速解凍。
用消毒液擦拭管體外表面,再將其移至II級A型層流細胞培養(yǎng)通風櫥中。
打開管蓋,使用1 mL移液器上下吹打細胞懸液以分散細胞。
從管中吸取20 uL細胞懸液,并將其稀釋于20 uL臺盼藍溶液中(如:Gibco?臺盼藍,貨號 15250-061)。
使用血細胞計數(shù)板來確定每毫升懸液中的活細胞數(shù)。
將管中懸液(1 mL)稀釋至產(chǎn)品說明中的濃度(例如1.25 x 10E4活細胞/毫升,Gibco? 新生人表皮角質(zhì)形成細胞)。
將5 mL細胞懸液加入25 cm2培養(yǎng)瓶,或?qū)?5 mL細胞懸浮液加入75cm2培養(yǎng)瓶中。
搖勻培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基以分散細胞。許多類型的細胞都會迅速貼壁,如果沒有在傳代后即刻搖勻細胞,細胞可能生長不均勻。
在37°C、5% CO2/95%空氣、濕度細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細胞。為了獲得佳結(jié)果,培養(yǎng)開始后至少在24小時之內(nèi)不要擾動細胞。
是否可以對擴增后的PLC-PRF-5細胞重新凍存?如果可以該如何操作?
當從乾思購買了凍存或正處于增殖期的細胞,可對其進行擴增和重新凍存。不過,凍存操作可能會對細胞的生長狀態(tài)有所影響。下列實驗方案為大家提供了一份培養(yǎng)基凍存細胞的基礎(chǔ)指南。
請注意:由于凍存設(shè)備與個人技術(shù)之間的差異,我們無法確保使用本方案凍存的細胞在復蘇后能夠保持活力,我們也無法為研究用戶實驗室凍存細胞的效果進行擔保。
使用37°C水浴化凍培養(yǎng)基或4°C條件下過一個晚上進行化凍。
如果在水浴中進行化凍,請確保溫度不要過37°C,也勿將該產(chǎn)品延長時間置于37°C。
培養(yǎng)基在使用前應置于4°C條件下平衡。為獲得優(yōu)結(jié)果,大家使用能夠控制變溫速率的冰箱。如果缺少能夠控制變溫速率的冰箱,也可使用細胞凍存盒。
如需用酶試劑解離培養(yǎng)器皿表面的細胞,則需使用對應的終止溶液重懸細胞以中和酶的效果。
通過離心沉淀PLC-PRF-5細胞。
去除上清液后,使用預冷的培養(yǎng)基以5x10E5至3x10E6細胞/毫升的密度重懸細胞。
將細胞懸液分裝至合適數(shù)量的凍存管中。
將細胞盡快冷卻至4°C。
如果使用控制變溫速率的冰箱:以每分鐘降低1°C的速率冰凍樣品,直至–40°C。之后按照每分鐘降低2°C的速率降至–90°C左右。
如果使用細胞凍存盒:請按照說明書來準備凍存盒。
為獲得佳結(jié)果,大家在細胞溫度降至–80°C后,盡快將凍存管轉(zhuǎn)移至液氮儲存設(shè)備的氣相中。
作為培養(yǎng)基的替代品,可使用該凍存細胞的基礎(chǔ)培養(yǎng)基,添加10%胎牛血清(FBS)和10% DMSO進行細胞凍存。請注意不將培養(yǎng)基用于人表皮黑素細胞的凍存操作。
乾思生物科技實驗室溫馨提醒:
組織塊貼壁法分離細胞時:注意組織塊貼壁2-3h后,補液時沿壁輕輕加入培養(yǎng)基,防止組織塊漂浮。
關(guān)于細胞培養(yǎng)還有很多問題需要解答,怎么辦?
歡迎咨詢,為你排憂解難!
四、PLC-PRF-5細胞售后服務(wù)政策
Acris、 abcam、cst、Biorbyt、santa、Novus、sigma、lifespan、NEB、roche、ABI、R&D millipore、BD、Qiagen Cayman、Jackson Life、GeneTex、Bio-Rad DSHB、tocris、peprotech 等;部分產(chǎn)品現(xiàn)貨,低比價,另常備、Trizol、DMSO、lipo2000、lipo3000、SC-2004、SC-2005常備現(xiàn)貨 ;貨期短,價格優(yōu),售后齊全。
PLC-PRF-5細胞污染問題,請在收到產(chǎn)品48小時內(nèi),給我們提出真實的實驗結(jié)果;細胞活性問題,請在收到產(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果,我們調(diào)查核實后予免費調(diào)換,不收取任何費用。
需要客戶PLC-PRF-5細胞細胞培養(yǎng)說明、細胞操作處理方法、細胞質(zhì)量問題反饋表。
如用戶收到細胞8-30天之內(nèi),因處理不當造成細胞死亡或污染,我公司將優(yōu)惠價重新一株原細胞
PLC-PRF-5細胞質(zhì)量可靠,售后有保障
我?guī)旒毎?000種,來源于美國ATCC,細胞都是經(jīng)過嚴格質(zhì)量控制。
凍存細胞時間為5-7個工作日,活細胞為7-15個工作日。
由于細胞庫現(xiàn)有細胞類目多,為了不出現(xiàn)混亂錯誤,需要了解PLC-PRF-5細胞相關(guān)細胞價格及詳細資料請老師告訴我們,對您造成的不便還請見諒!
(BY WHY)